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使用等离子体纳米平台检测凝血酶的无酶无标签视觉传感策略
2020/3/26 10:21:34 易丝帮

DOI: 10.1039/c9an02340b

本文开发了一种无酶无标记视觉传感策略,以使用等离子体纳米平台灵敏地检测凝血酶。在电纺纳米纤维膜上设计了凝血酶触发的催化发夹组装(CHA)扩增反应和G-四链体/血红素DNAzyme控制的等离子体信号读出装置。纳米纤维膜由于其较大的比表面积和多孔结构,提高了B-H2的负载能力和界面相互作用效率。利用这种等离子体纳米平台对人血清样品中低至1.0pM的凝血酶进行了灵敏的肉眼检测。这种视觉策略可以很好地区分凝血酶和其他共存蛋白。此外,视觉传感平台具有良好的可重用性和长期稳定性。该无酶无标记等离子体纳米平台价格低廉,易于操作且灵敏度高,在蛋白质生物标志物的即时检测中具有潜在的应用前景。

 

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图1.用于可视化痕量凝血酶的等离子体纳米平台示意图。(A)凝血酶触发的CHA扩增反应和(B)DNAzyme控制的等离子体信号读出装置。


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图2.(A)在不同条件下对应于基于H2改性的纳米纤维膜的等离子体纳米平台的UV-vis吸收光谱:(a):无;(b)H1;以及(c)H1+10nM凝血酶。插图显示了颜色变化的相应照片。(B)本地PAGE数据。泳道1:H1;泳道2:H2;泳道3:H1+H2;泳道4:H1+H2+200nM凝血酶;泳道5:退火(H1+H2);泳道6:G4;泳道7:H1+H2+200nM凝血酶+G4;泳道8:退火(H1+H2)+G4。[H1]=[H2]=[G4]=0.8μM。


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图3.在测试溶液中DNAzyme/纳米纤维膜(A)与含有0nM(虚线)或10nM(实线)凝血酶的DNAzyme/连续薄膜(B)的性能比较。


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图4.用等离子体纳米平台检测凝血酶时,测试溶液(A)以及550nm(-ΔA550)(B)处紫外-可见吸收度相应降低的照片。有或没有10nM凝血酶(C和D)作用下生长的Au纳米粒子的TEM图像。


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图5.等离子体纳米平台对凝血酶的抗BSA、HSA、GOx和Lzm的特异性。插图显示了相应的颜色变化。所有蛋白质的浓度为5nM。


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图6.真实样品中凝血酶检测的照片。


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